Цитологическое исследование синовиальной жидкости. Исследование синовиальной жидкости имеет большое значение при Упрощенный подсчет цитоза синовиальной жидкости

Стандартизованная аналитическая технология клинического лабораторного анализа синовиальной жидкости.

1. Цель исследования

Технология «Клинический лабораторный анализ синовиальной жидкости» выполняется с целью диагностики заболеваний суставов, а также для мониторинга течения заболевания и эффективности лечения .

Исследование синовиальной жидкости имеет большое значение при:

Все сотрудники должны выполнять инструкции и правила техники безопасности, изложенные в технических паспортах к электрическим приборам, используемым в технологии (фотометры, микроскопы, центрифуги); персонал, работающий с реактивами, должен быть обучен обращению с ними, использовать средства персональной защиты, соблюдать правила личной гигиены.

Для предупреждения пожаров необходимо соблюдать правила пожарной безопасности в соответствии с действующими нормативными документами.

Таким образом, необходимо строго придерживаться всех пунктов инструкций по технике безопасности, пожарной безопасности и биологической безопасности.

2.3 Условия выполнения технологии клинического лабораторного анализа синовиальной жидкости и функциональное назначение

Клинический лабораторный анализ синовиальной жидкости выполняется в клинико-диагностических лабораториях специализированных амбулаторно-поликлинических и стационарных учреждений здравоохранения (ревматологических и артрологических центров).

Функциональное назначение услуги: проводится с целью диагностики болезней суставов, наблюдения за течением и прогрессированием болезни и эффективностью лечения.

2.4.Материальные ресурсы, необходимые для выполнения технологии: приборы, средства измерения, лабораторное оборудование

2.4.1. Микроскоп бинокулярный с иммерсией и встроенным осветителем.

2.4.2.Микроскоп поляризационный.

2.4.3. Центрифуга лабораторная (с охлаждением: 5-8 оС).

Для приготовления осадка синовиальной жидкости должны использоваться центрифуги, обеспечивающие 1000 об/мин. При использовании центрифуги необходимо строго следовать инструкции производителя.

2.4.4. Счетчик-калькулятор для подсчета лейкоцитарной формулы крови (для подсчета синовиоцитогрммы).

2.4.5. Штатив для пробирок.

2.4.6. Контейнеры и кюветы для окраски и фиксации мазков.

2.4.7. Приспособление для высушивания мазков.

2.4.8. Стеклянные (пластиковые) изделия.

2.4.8.1. Центрифужные пробирки (10 мл).

Для макроскопического изучения СЖ лучше использовать прозрачные стеклянные пробирки. Для центрифугирования СЖ используются центрифужные пробирки из пластика, которые должны иметь коническую форму для концентрирования осадка, градуировку для определения количества полученной при пункции сустава синовиальной жидкости и закрываться крышками для уменьшения опасности разбрызгивания. Пробирки должны быть химически чистыми и маркированными для правильной идентификации пациента. Возможно применение вакуумных пробирок.

2.4.8.2. Камера Горяева.

2.4.8.3. Стекла предметные и стекла покровные для микроскопии нативного препарата.

Стекло предметное (желательно с матовым полем для маркировки, размер 26 х 76 х 1.1 мм.) для микроскопии окрашенного препарата.

Стекло предметное со шлифованным краем (размер 26 х 76 х1.1 мм.) или шпатель из пластика для приготовления мазка.

2.4.8.4. Пипетки для переноса синовиальной жидкости. В настоящее время используют пластиковые пастеровские пипетки с тонко оттянутым концом и баллончиком, предназначенные для стандартизации объема капли осадка и уменьшения риска биологической опасности, связанной с ресуспендированием или переносом синовиальной жидкости. Они должны быть сухими и химически чистыми.

2.4.8.5 Стеклянные палочки.

2.5 Реактивы

2.5.1 Растворы фиксаторов-красителей и другие необходимые реактивы для приготовления окрашенных мазков (см. ГОСТ Р Цитологическое исследование пунктата костного мозга);

2.5.2 раствор уксусной кислоты 5%;

2.5.3 ЭДТА (двукалиевая или двунатриевая соль).

2.5.4. раствор ализаринового красного 2%.

2.6 Прочий расходуемый материал

2.6.1. Перчатки резиновые.

2.6.2. Дезинфицирующие средства.

3. Характеристика методики выполнения технологии исследования синовиальной жидкости

3.1 Получение образцов синовиальной жидкости

Для правильного проведения преаналитического этапа необходимо соблюдать требования стандарта ГОСТ Р 53079.4-2008. .

Пункцию сустава проводит врач-клиницист.

Правила хранения и транспортировки образцов синовиальной жидкости изложены в

приложении А.

При пункции сустава СЖ собирают в стерильные центрифужные пробирки (2-3 или более, в зависимости от количества полученной СЖ) и немедленно передают в клинико-диагностическую лабораторию. Одну из пробирок (или более, в зависимости от числа полученных пробирок) направляют в микробиологическую лабораторию (отдел) для проведения микробиологических исследований, а остальные используют для проведения клинического лабораторного исследования СЖ (определения физико-химических свойств и микроскопического исследования нативных и окрашенных азур-эозином препаратов с подсчетом синовиоцитограммы, подсчета клеточных элементов в 1мкл (цитоз), а также выполнения биохимических и иммунологических исследований. Биохимические и иммунологические исследования проводят в супернатанте после центрифугирования СЖ, а осадок используют для поиска кристаллов в нативном препарате с применением поляризационного микроскопа, а также для подсчета синовиоцитограммы в окрашенном мазке. Для подсчета клеток можно собирать СЖ в пробирку, содержащую антикоагулянт (двунатриевую или двукалиевую соль ЭДТА), выпускаются специальные вакуумные пробирки с К2ЭДТА, которые могут быть использованы для взятия СЖ.

При наличии соответствующих показаний (подозрение на наличие клеток новообразований) окрашенный мазок направляется в цитологическую лабораторию.

3.2 Идентификация образца

В направлении на исследование должна быть включена следующая информация: фамилия и инициалы пациента, возраст или дата рождения, пол, отделение медицинского учреждения и палата (в стационаре), номер медицинской карты (идентификационный номер), диагноз, дата и время сбора образца синовиальной жидкости, время доставки образца в лабораторию. Должны быть перечислены все показатели, которые требуется определить. При необходимости указать лекарства, вводимые в пунктируемый сустав.

Немаркированные или неправильно маркированные образцы не пригодны для исследования, о чем необходимо уведомить клинициста, назначившего анализ.

3.3 Приемлемость образца

Так как точность результатов исследования синовиальной жидкости во многом зависит от качества доставленного образца, необходимо неукоснительно следовать правилам хранения и транспортировки синовиальной жидкости (приложение А).

После доставки образца синовиальной жидкости в лабораторию сотрудник лаборатории, принимающий материал, должен проверить правильность оформления направления на анализ, маркировку посуды (код или фамилия больного и другие данные должны быть идентичны данным, указанным в бланке-направлении) и зарегистрировать поступивший материал.

Синовиальная жидкость, собранная в пробирку с К2 ЭДТА, должна исследоваться в течение также 30 мин., а при хранении в холодильнике (температура 3-50С) – не позднее, чем через 24 часа (только для проведения исследования окрашенных мазков).

П р и м е ч а н и е ─ Длительное хранение супернатанта СЖ допускается при температуре -70О С для биохимических и иммунологических исследований.

Отсрочка анализа и использование охлаждения образца отмечаются в бланке ответа.

Перед исследованием образцы должны быть доведены до комнатной температуры.

3.4 Макроскопическая оценка и исследование физико-химических свойств синовиальной жидкости

3.4.1.Количество синовиальной жидкости в норме варьирует от 0,2 до 2,0 мл (в зависимости от величины сустава). При различных заболеваниях суставов количество СЖ может достигать 100 мл и более.

3.4.2. Цвет синовиальной жидкости.

Цвет синовиальной жидкости в норме – светло-желтый

П р и м е ч а н и е ─Светло-желтая или желтая окраска синовиальной жидкости наблюдается при дегенеративных заболеваниях суставов; кровянистая – при травматических артритах ; для воспалительных болезней суставов (ревматоидный артрит (РА), реактивный артрит (РеА), анкилозирующий спондилоартрит, псориатический артрит) характерны разные оттенки желтого и коричневого цвета (светло-желтого, желтого, лимонного, светло-коричневого, бурого, ягнтарного или оранжевого); при подагре наблюдается светло-желтая, зеленовато-желтая, молочно-белая, молочно-желтая, розовато-белая окраска СЖ; при пирофосфатных артритах и хондрокальцинозах – желтая или молочно-желтая, при септических артритах – серовато-желтая, зеленовато-желтая или кровянистая.

3.4.3. Прозрачность синовиальной жидкости.

Нормальная синовиальная жидкость абсолютно прозрачна. Помутнение обычно обусловлено увеличением числа клеточных элементов, наличием кристаллов или микроорганизмов.

Оценка прозрачности.

Различают 4 степени прозрачности: прозрачная, полупрозрачная, умеренно-мутная и интенсивно-мутная.

П р и м е ч а н и е – при дегенеративных заболеваниях суставов (остеоартроз) СЖ прозрачная и полупрозрачная; при воспалительных заболеваниях (РА, серонегативные артриты, подагра, пирофосфатные артриты) – полупрозрачная, умеренно-мутная или интенсивно-мутная; при септических артритах – интенсивно-мутная, густая.

3.4.4. Наличие осадка.

В норме в СЖ осадка нет. Он появляется только при патологии и, как правило, представляет собой обрывки клеточных мембран, фибриновыъх нитей, фрагменты тканей, образующиеся в результате деструкции хряща и синовиальной оболочки, а также кристаллы.

П р и м е ч а н и е ─ При дегенеративных заболеваниях суставов в СЖ обнаруживают аморфный осадок при амилоидозе. При воспалительных заболеваниях суставов осадок обнаруживают практически всегда. В СЖ больных РА, особенно часто у детей с ювенильным РА, можно наблюдать зернистый осадок, напоминающий рисовые зерна или «рисовые тельца», образованные из микроскопических фрагментов насыщенной фибрином некротической синовиальной оболочки. Подобный осадок может быть показателем высокой воспалительной активности процесса.

3.4.5. Вязкость

Важнейшей особенностью СЖ, отличающей ее от других биологических жидкостей, является присутствие гиалуроновой кислоты – высокомолекулярного полимера. Именно гиалуроновая кислота, обладая высокой вязкостью, главным образом обеспечивает выполнение основных функций СЖ. Существует прямая зависимость между содержанием, молекулярной массой гиалуроновой кислоты и вязкостью СЖ.

Методы определения вязкости.

Количественные характеристики вязкости СЖ определяют с помощью вискозиметра.

В рутинных исследованиях обычно используют метод со стеклянной палочкой:

стеклянная палочка опускается в СЖ, а затем вынимается. Вязкость оценивается по длине муциновых нитей, различают три степени вязкости:

при длине нити выше 5 см – вязкость высокая, до 5 см – средняя, менее 1 см – низкая.

Возможно выражение вязкости в бальных единицах: 1 - высокая, 2 - средняя, 3 - низкая. В норме вязкость СЖ высокая.

Интенсивность вязкости зависит от концентрации кристаллов, степени полимеризации гиалуроновой кислоты и температуры.

П р и м е ч а н и е ─ Использование инструментальных методов с применением различных вискозиметров требует (кроме наличия прибора) целого ряда дополнительных операций и в связи с этим значительных затрат времени, не давая при этом какой-либо принципиально новой информации по сравнению с доступным лабораторным тестом.

4.4.6. Определениение плотности муцинового сгустка в синовиальной жидкости.

Гиалуроновая кислота в СЖ существует в комплексе с белками, известном как муцин. Определение муцинового сгустка имеет большое диагностическое значение при воспалительных заболеваниях. Тест на муцин в синовиальной жидкости хорошо коррелирует с вязкостью.

Методы исследования плотности муцинового сгустка.

Принцип метода: при воздействии на СЖ уксусной кислоты образуется муциновый сгусток.

Ход определения:

В пробирку, содержащую 3 мл 5% раствора уксусной кислоты (СН3СООН), добавляют каплю СЖ. Интенсивно встряхивают содержимое пробирки в течение 1 мин., образуется осадок. Различают 4 степени плотности осадка: плотный (осадок выглядит плотным комком), умеренно плотный (вид разветвленной, но не распавшейся структуры), умеренно рыхлый и рыхлый – в большей или меньшей степени распадается на мельчайшие частицы. Образование плотного муцинового сгустка свидетельствует о значительном содержании муцина.

В норме осадок плотный.

П р и м е ч а н и е 1 ─ При невоспалительных артропатиях муциновый сгусток как правило – плотный или умеренно плотный.. При воспалительных заболеваниях суставов - умеренно рыхлый и рыхлый.

П р и м е ч а н и е 2 ─ Определение вязкости и плотности муцинового сгустка имеет важное значение для дифференциации «невоспалительного» и воспалительного характера процесса в суставе. Эти методы могут быть взаимоконтролирующими: показатели одного метода строго соответствуют показателям другого. Высокая вязкость соответствует плотному, средняя – умеренно плотному, низкая – умеренно рыхлому и рыхлому муциновому сгустку.

3.5 Микроскопическое исследование синовиальной жидкости

3.5.1.Требования к образцу синовиальной жидкости для микроскопического исследования.

Перед проведением микроскопического исследования врач должен иметь информацию о времени получения синовиальной жидкости и результатах оценки физико-химических свойств.

В настоящее время для взятия биологических жидкостей выпускаются вакуумные пробирки, содержащие антикоагулянт (К2ЭДТА), который является также консервантом для клеточных элементов и не влияет на их морфологию .

П р и м е ч а н и е 1 ─ Синовиальную жидкость, стабилизированную К2ЭДТА нельзя использовать для обнаружения рагоцитов.

Проводится три вида микроскопического исследования:

подсчет клеток в нативной синовиальной жидкости в камере Горяева (цитоз), исследование нативного препарата и окрашенного азур-эозином препарата с подсчетом синовиоцитограммы.

3.5.2 Подсчет количества клеточных элементов в 1 мкл синовиальной жидкости камере Горяева (определение цитоза).

Ход исследования.:

Исследование проводят в нативной или стабилизированной К2ЭДТА синовиальной жидкости.

В пробирку налить 0,4 мл изотонического или гипотонического раствора NaCI.

Суспензию профильтровать и хранить в холодильнике в склянке из темного стекла. Непосредственно перед исследованием необходимое количество краски профильтровать через миллипоровый фильтр.

20 мкл краски смешать с равным объемом СЖ или осадка, полученного после центрифугирования. Приготовить нативный препарат и микроскопировать лучше в поляризационном микроскопе: кристаллы овоидной формы, 2-3 мкм в диаметре, насыщенной красной окраски с розовым ореолом.

П р и м е ч а н и е 4 ─ Эти кристаллы обнаруживаются при гидроксиапатитной артропатии.

В синовиальной жидкости могут быть также обнаружены кристаллы оксалата кальция, холестерина, липидов, Шарко-Лейдена и др.

П р и м е ч а н и е 5 ─ Кристаллы оксалата кальция (С2СаО4 · Н2О) имеют обычно кубическую форму но могут образовывать бесцветные, блестящие, сильно преломляющие свет кристаллы различной величины в форме октаэдров или прямоугольников, напоминающих почтовые конверты. Иногда встречаются кристаллы оксалата кальция округлой формы и с перехватом, напоминающие песочные часы, гимнастические гири или банты (С2СаО4 · 2Н2О). Эти кристаллы могут фагоцитироваться полиморфоядерными лейкоцитами (нейтрофилами).

П р и м е ч а н и е 6 ─ Жидкие кристаллы липидов представлены на темном поле в виде черных мальтийских крестов, делящих каждую каплю липида на четыре белых блестящих сегмента. Капли нейтрального жира не обладают эффектом двулучевого преломления света.

Кристаллы холестерина, оксалата натрия и жидкие кристаллы липидов не специфичны для какого-либо определенного суставного заболевания и могут встречаться при различных артропатиях, отражая нарушение метаболизма.

П р и м е ч а н и е 7 ─ В СЖ можно обнаружить амилоидные глыбки. Это бесцветные образования округлой формы, слоистого строения, напоминающего спил дерева, с характерным блеском. Идентифицируются в нативных препаратах при увеличении х400, а также с иммерсией при увеличении х1000. Амилоид можно определить в нативной СЖ, окрашенной красным конго. Полученный препарат можно смотреть как в световом, так и в поляризационном микроскопе.

Амилоидные глыбки находят при заболеваниях, слпровождающихся амилоидной артропатией.

Кристаллы гематоидина.

Кристаллы гематоидина образуются при распаде гемоглобина в гематомах без доступа кислорода. Это слегка вытянутые в длину ромбики и/или иглы золотисто-желтого цвета. Кристаллы гематоидина хорошо различимы как в нативном, так и в окрашенном азур-эозином препаратах. Так как обычно в СЖ эти кристаллы достаточно мелкие, нативные препараты рекомендуется микроскопировать на иммерсии. В очаге воспаления эти кристаллы могут быть фагоцитированы макрофагами или располагаться на поверхности клеточных элементов.

П р и м е ч а н и е 8 ─ При травме и внутрисуставном кровотечении в полости сустава создаются условия, при которых могут образовываться кристаллы гематоидина.

Кристаллы Шарко-Лейдена.

Кристаллы Шарко-Лейдена по форме напоминают стрелку компаса или резко вытянутый в длину ромб. Обычно кристаллы Шарко-Лейдена расположены на фоне детрита или в сочетании с большим количеством эозинофилов и образуются при распаде эозинофилов из эозинофильной зернистости, эти кристаллы можно обнаружить в СЖ больных, страдающих аллергическим синовитом.

Кристаллы лекарственных препаратов

Стероиды. Внутрисуставные инъекции стероидных препаратов приводят к их кристаллизации внутри суставов, где могут сохраняться до 10 недель. Обнаружение этих кристаллов при микроскопическом исследовании нативных препаратов и последующая неправильная дифференцировка может привести к ошибочным заключениям.

Неклеточные и некристаллические элементы в СЖ.

В СЖ могут быть обнаружены фрагменты хряща и поврежденных связок. Фрагменты хряща в нативном препарате можно распознать по характерному шелковистому блеску. Обнаруживают также фрагменты хряща, содержащие кластеры хондроцитов и фрагменты мениска, которые представлены волнистыми коллагеновыми волокнами и также хондроцитами; фрагменты связок представлены длинными тонкими фибриллами и параллельно расположенными нитями коллагена

П р и м е ч а н и е 9 ─ Встречаются наиболее часто в СЖ после травмы коленного сустава.

П р и м е ч а н и е 10 ─ Несмотря на высокую чувствительность метода поляризационной микроскопии, при его использовании возможны серьезные ошибки, которые обычно возникают из-за недостаточно высокой разрешающей способности конкретного микроскопа, наличия посторонних кристаллоподобных примесей и повреждений на предметном или покровном стекле. Микроскопист должен учитывать возможность помех и хорошо знать принципы распознавания кристаллов.

3.5.5. Микроскопическое исследование препаратов синовиальной жидкости, окрашенных азур-эозином (с подсчетом синовиоцитограммы).

Приготовление мазков СЖ и методы их окраски (п.5.5.2).

Клеточный состав синовиальной жидкости (синовиоцитограмма).

Определение клеточного состава СЖ – важнейший этап ее исследования, позволяющий уточнить диагноз, определить степень воспалительной активности процесса и прогноз. Определение количественного распределения клеток (синовиоцитограмма) является важнейшим показателем для дифференциальной диагностики болезней суставов. Подсчет процентного соотношения клеток проводят так же, как и подсчет лейкоцитарной формулы крови. (подсчитывают 100 клеток в мазке и рассчитывают процентное содержание каждого вида клеток).

В норме в СЖ преобладают клетки тканевого происхождения (синовиоциты и гистиоциты) – до 65%. Лимфоциты составляют около 30%, а моноциты и нейтрофилы – 1-2%.

Клетки крови в СЖ.

Нейтрофилы (полиморфноядерные лейкоциты).

Нейтрофилы в 1,5-2 раза больше эритроцита, по диаметру (14-16 мкм). Соотношение ядра и цитоплазмы сдвинуто в сторону ядра. Цитоплазма сиреневого цвета, заполнена мелкой, пылевидной зернистостью, имеющей окраску ядра клетки. Ядра состоят из 3-4 сегментов, с четким делением на окси - и базихроматин. При дистрофии количество сегментов в нейтрофилах резко увеличивается до 5-7 (гиперсегментация). При апоптозе в нейтрофиле фрагменты ядра сливаются в одну или две гиперхромные гомогенные, бесструктурные массы правильной круглой формы.

В нормальной СЖ количество нейтрофилов не превышает в формуле 1-2%.

П р и м е ч а н и е 1 ─ При ревматоидном артрите содержание нейтрофилов достигает 90%, а количество лимфоцитов снижается до 10%. Аналогичная картина отмечается при анкилозирующем спондилоартрите. При воспалительных заболеваниях и внутрисуставном кровотечении нейтрофилы составляют в формуле СЖ 60-80%, а при септической артропатии - более 95%.

Лимфоциты.

Это клетки до 12 мкм в диаметре. Соотношение цитоплазмы и ядра сдвинуто в сторону ядра (9: 1). Ядро грубо глыбчатой структуры, базофильная цитоплазма узким ободком окружает ядро, иногда просматривается зона просветления вокруг ядра.

В нормальной СЖ количество лимфоцитов колеблется от 8 до 30%.

П р и м е ч а н и е 2 ─ При воспалительных заболеваниях преобладают нейтрофилы, а при дегенеративных – лимфоциты. При дегенеративных заболеваниях суставов и травматическом артрите в СЖ содержание лимфоцитов достигает 85%. Преобладают лимфоциты в формуле также при токсико-аллергических синовитах и синовиальной форме туберкулеза. При артритах вирусной этиологии, например вызванной вирусом HTLV-1 - появляются атипичные лимфоциты, количество которых достигает 20%.

Моноциты.

П р и м е ч а н и е 3 ─ Моноциты встречаются при различных суставных артропатиях, в том числе при вирусных артритах и при моноцитарных артритах, а также при повреждении имплантационных протезов.

Кроме этих клеток в СЖ (при патологии) могут быть обнаружены в небольшом количестве другие клетки крови: эозинофилы, базофилы, плазматические клетки.

П р и м е ч а н и е 4─ Эозинофилы встречаются в СЖ крайне редко, идентичны эозинофилам периферической крови.

П р и м е ч а н и е 5─ Базофилы встречаются в незначительном количестве при воспалительных артритах, серонегативной артропатии, невоспалительных артропатиях, связанных с травмой.

П р и м е ч а н и е 6 ─ Плазматические клетки встречаются в СЖ при воспалительных артропатиях. Обнаружение плазматических клеток характерно, в частности, для ревматоидного артрита, т. е. для длительного вяло текущего воспалительного процесса.

Тканевые клетки в СЖ.

Синовиоциты.

Эти клетки относятся к однослойному уплощенному эпителию, покрывающему синовиальные оболочки суставов. По своей морфологии они идентичны мезотелиальным клеткам. Синовиациты - эпителиальные клетки диаметром 18-25 мкм, с различным ядерно/цитоплазматическим соотношением. Они содержат центрально или эксцентрично расположенные ядра круглой или овальной формы, мелко-глыбчатой или петлистой структуры, окруженные широким ободком базофильной цитоплазмы, иногда с «оборочкой» по периферии. Цитоплазма в перинуклеарной зоне у некоторых синовиоцитов содержит мелкую зернистость. Синовиоциты отторгаются от поверхности синовиальной оболочки сустава и обнаруживаются в СЖ при артропатиях. Синовиальные клетки могут содержать 2 и более ядер (многоядерные).

Различают три вида синовиоцитов:

тип А – макрофагальные синовиоциты, способные к фагоцитозу;

тип В – синовиальные фибробласты, способные к синтезу и секреции гиалуроновой кислоты;

тип АВ – переходные формы клеток, сочетающие эти оба свойства.

Гистиоциты.

Тканевые макрофаги – клетки размером мкм с округлым или моноцитоидным компактным ядром, окруженным мелкозернистой или не содержащей зернистости цитоплазмой.

П р и м е ч а н и е 7 ─ Гистиоциты всегда присутствуют в СЖ при воспалительных процессах.

П р и м е ч а н и е 8 ─ В СЖ могут быть обнаружены многоядерные клетки, которые представляют собой синовиоциты или плазматические клетки и имеют такое же значение как и мононуклеарные варианты этих клеток.

П р и м е ч а н и е 9 ─ Обнаружение LЕ –клеток, содержащих в цитоплазме включения гомогенезированного ядерного материала, в СЖ в отличие от периферической крови, не является прямым указанием на СКВ. Однако сочетание LE-клеток с большим количеством лимфоцитов в СЖ позволяет заподозрить наличие у больного СКВ.

П р и м е ч а н и е 10 ─ Клетки в митозе.

Митотические фигуры не имеют диагностического значения. Синовиоциты в состоянии деления подтверждают процесс пролифераии клеток выстилки суставной сумки.

Недифференцируемые клетки.

Недифференцируемые клетки отмечаются практически во всех синовиограммах.

В тонких, хорошо сделанных мазках СЖ, фиксированных фиксаторами или фиксаторами- красителями и докрашенных азур-эозином, все клеточные элементы поддаются дифференцировке. Только в толстых мазках, приготовленных неопытной рукой лаборанта из вязкой, гиперклеточной и предварительно неразведенной СЖ, встречаются клетки, неподдающиеся дифференцированию. Это могут быть любые клеточные элементы - и тканевые, и кровяные. В таких препаратах практически невозможно обнаружить кристаллы и микроорганизмы.

4. Регистрация результатов анализа синовиальной жидкости

Каждый сотрудник лаборатории должен использовать одни и те же формы (бланки результатов анализов) для сообщения полученных результатов. Форма бланка должна содержать название лаборатории и медицинский организации; информацию о пациенте, достаточную для его идентификации; название биологического материала и всех исследуемых показателей; дату получения пробы и, если это необходимо, время получения; результаты исследования; референтные интервалы; фамилию и подпись сотрудника, выполнившего исследование. Порядок выдачи результатов должен быть определен инструкцией, утвержденной руководителем медицинской организации

5. Обеспечение качества выполнения технологии анализа синовиальной жидкости

5.1. Программы обеспечения качества

Программы обеспечения качества включают последовательный мониторинг каждого аспекта процедуры для обеспечения гарантии достаточно высоких возможностей диагностики и наблюдения состояния пациента. Программы обеспечения качества должны включать все этапы работы и устанавливать связи между всеми составляющими процесса (пациент, лаборатория, клиницист). Контроль необходим и на этапах взятия образца, хранения, доставки, ручной обработки, ведения регистрации, выдачи документов. Нуждается в контроле также и техническая компетентность персонала, непрерывное продолжение образования. Для успешного осуществления всех контрольных мероприятий необходимо следовать правилам, изложенным в стандарте ГОСТ Р ИСО 15189 -2006. .

5.2. Ведение регистрации контрольных мероприятий

Регистрация проведения контроля должна осуществляться на всех уровнях: преаналитическом, аналитическом и постаналитическом, для каждого этапа должны быть разработаны и документированы правила проведения всех процедур.

Для клиницистов должна быть разработана форма запроса на исследование, включающая дату назначения и взятия пробы, информацию для идентификации пациента, диагноз, сведения о приеме лекарств или диагностических процедурах, если они могут влиять на результаты исследования.

Методика взятия образцов СЖ должна быть стандартизована и подробно описана в соответствующей инструкции для врачей и сестер хирургического отделения, производящих пункции суставов.

В инструкцию по доставке пробы должны быть включены условия и сроки хранения проб и правила безопасной транспортировки.

Для персонала лаборатории должны быть определены критерии для приема и отказа в приеме проб, требования по регистрации пробы, обработке, маркировке и хранению пробы до анализа. Аналитический этап проводится в соответствии с методиками исследований. На постаналитическом этапе необходимо разработать правила оценки приемлемости результатов анализа, которые должны включать оценку интерференции лекарственных препаратов, сравнение результатов с референтным интервалом, проверку правильности регистрации. Форма выдачи результатов должна быть утверждена в учреждении и согласована с лечебными отделениями.

5.3. Инструкции к используемым методикам лабораторных исследований

Методика процесса выполнения лабораторных исследований должна быть оформлена в виде документа и быть доступна на рабочем месте. Методика должна быть основана на методических указаниях или других документах, утвержденных в установленном порядке. Она должна включать критерии приемлемости или отбрасывания образцов СЖ (учитываются продолжительность срока хранения образца после взятия, достаточное количество СЖ для исследования); референтные интервалы; способ регистрации результатов; предосторожности, связанные с биологической опасностью исследуемого материала; причины получения ложноположительных и ложноотрицательных результатов.

5.4. Контроль качества микроскопических исследований.

При разработке требований к аналитической надежности визуального метода должны использоваться в качестве ориентира результаты исследования образцов биоматериала, произведенного исследователем, имеющим большой опыт визуального изучения изображений, правильного обнаружения и классификации исследуемых компонентов биоматериалов.

5.5. Непрерывное образование специалистов

Для обеспечения качества анализа квалификация персонала должна соответствовать сложности выполняемого исследования. Весь персонал лаборатории должен периодически (раз в пять лет) проходить обучение на циклах усовершенствования, которые проводятся медицинскими образовательными учреждениями, имеющими соответствующую лицензию. Каждый специалист должен заниматься самообразованием. Лаборатория должна иметь доступную для пользования современную литературу , включая периодические издания по лабораторной диагностике и атласы. Специалистам лаборатории необходимо участвовать в конференциях и семинарах.

6. Требования к режиму труда и отдыха, диете и ограничениям при подготовке пациента

Для персонала, осуществляющего взятие материала, должна быть разработана инструкция, содержащая, кроме процедуры взятия, условия подготовки пациента. Особенно важно влияние лекарств, например, введение в сустав стероидных гормонов, которые могут кристаллизоваться, (приложение А.2).

7. Трудозатраты на выполнение технологии клинического лабораторного анализа синовиальной жидкости

Таблица 1 - Трудозатраты в УЕТ на выполнение технологии «Клинический лабораторный анализ синовиальной жидкости»

Код услуги	Вид исследования	Трудозатраты в УЕТ
Специалиста со средним образованием	Врача клинической лабораторной диагностики, биолога
	Клинический лабораторный анализ синовиальной жидкости
	Регистрация (предварительная и окончательная: поступившего материала, паспортных данных пациентов, результатов исследований и т. д.), ручная или на компьютере.
	Оценка физических свойств СЖ, измерение количества
	Определение вязкости СЖ
	Определение образования муцинового сгустка
	Получение осадка СЖ при помощи центрифугирования и приготовление препаратов из осадка (для микроскопического исследования).
	Подсчет клеточных элементов СЖ в камере Горяева
	Микроскопическое исследование нативного препарата
	Микроскопическое исследование препарата, окрашенного азур-эозином с подсчетом процентного содержангия клеток.

ПРИЛОЖЕНИЕ А

(справочное)

Сбор образцов СЖ, условия хранения и доставки (преаналитический этап)

А.1 Введение

Пункция сустава произволится врачами-клиницистами.

Преаналитический этап проводится в лечебном отделении и после доставки биоматериала в лабораторию – в самой лаборатории. Врачами-клиницистами составляются заявки на исследования. В заявке должны быть указаны ФИО пациента, пол, возраст или год рождения, отмечен способ получения биоматериала, сустав, который подвергается пункции, время пункции, количество пробирок, заполненных СЖ, нативных и с К2 ЭДТА. Обязательно должен быть указан клинический диагноз и влияющие на анализ лекарственные препараты. Отсутствие в заказе диагноза или принимаемых пациентом лекарств, влияющих на результаты, может привести к неправильной трактовке полученных результатов и ошибке в постановке диагноза. Средний медицинский персонал отделения отвечает за подготовку пациента, срочную доставку пробирок с СЖ в клинико-диагностическую лабораторию.

Продолжение преаналитического этапа в лаборатории заключается в приеме и регистрации поступившего биоматериала, хранении его при необходимости до исследования, обработке и подготовке к исследованию.

Составление клиницистами заявки на анализы является очень важным моментом, так как правильность диагноза во многом зависит от правильно составленной заявки.

А.2 Подготовка пациента

Подготовка пациента к пункции сустава должна быть стандартизована.

Стероиды, вводимые в суставную сумку могут кристаллизоваться и мешать при диагностике патологического процесса или привести к неправильной диагностике, поэтому должно быть отменено внутрисуставное введение стероидов не менее чем за 5-7 дней до пункции сустава. Если введение в суставную сумку стероидов отменить заранее невозможно, врач-клиницист должен отмечать введение этих препаратов в заявке на исследование. В заявке, кроме паспортных данных пациента, должны быть отмечено, пункция какого сустава проведена, количество заполненных СЖ пробирок, время пункции, обязательно указать клинический диагноз, хотя бы на уровне диагностического предположения.

А.3 Хранение и доставка.

Для проведения общего анализа СЖ обычно в лабораторию доставляют сразу после пункции. Производится исследование нативного препарата, приготовленного из нестабилизированной СЖ для обнаружения рагоцитов и кристаллов, а также определения цитоза. Исследование окрашенного мазка можно производить при хранении пробирки с СЖ, стабилизированной К2 ЭДТА, в холодильнике при температуре +3- +50С в течение 24 часов.

Длительное хранение СЖ допускается при температуре -70О С, эти образцы используются для биохимических и иммунологических исследований.

П р и м е ч а н и е ─ В настоящее время выпускаются специальные вакуумные пробирки и контейнеры разового пользования для сбора биологических жидкостей объемом 100 мл из небьющегося материала без реактивов, с К2ЭДТА или другими рективами.

Библиография

1.Захарова синовиальной жидкости. В кн.: Ревматология. Национальное руководств. Под ред. академика РАМН и академика РАМН. М., «ГЭОТАР-Медиа»,2008, стр. 62-66.

2.Инструкция по мерам профилактики распространения инфекционных заболеваний при работе в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений, Москва, 1991.

3. Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений. СанПиН 2.1.1.728-99., Москва, 1999 г.

4. ГОСТ Р ИСО 52095 -2:2003) Требования безопасности.

5. ГОСТ Р 53079.4-2008 Технологии медицинские лабораторные. Обеспечение качества клинических лабораторных исследований. Часть 4 Правила ведения преаналитического этапа клинических лабораторных исследований.

6. ГОСТ Р ИСО 15189 -2006 Лаборатории медицинские. Частные требования к качеству и компетентности.

Проект стандартизованной технологии подготовили:

, (ММА им. И.М. Сеченова), (НИИ ревматологии РАМН), (РМАПО), (РОНЦ им. РАМН), (поликлиника № 000 г. Москвы).

Общеклиническое исследование (анализ) жидкости из сустава включает в себя определение физико-химических свойств жидкости и микроскопическое исследование клеточных элементов.

Макроскопические характеристики синовиальной жидкости (цвет, степень мутности и вязкости) оценивают в проходящем свете. Вязкость оценивают по длине муциновой нити: длина нити, образованной каплей, выпущенной из шприца, в норме должна быть более 3 см. При воспалении вязкость снижается, соответственно длина нити уменьшается.

Манипуляцию производят в положении пациента сидя с рукой, опущенной вдоль туловища и лежащей на колене. Игла вводится спереди, конец ее направлен несколько вниз и латерально, по направлению к клювовидному отростку лопатки; игла продвигается кзади, по направлению к суставной поверхности лопатки. Возможна также пункция плечевого сустава через задний доступ.

Пациент сгибает руку в локтевом суставе под углом 60°, запястье находится в пронированном положении. Точка вкола иглы располагается на латеральной поверхности сустава, между латеральным надмыщелком плечевой кости и лучевой костью.

Коленный сустав и его околосуставные сумки могут пунктироваться в положении больного на спине, с разогнутой в коленном суставе нижней конечностью. Игла, обычно диаметром 0,8 мм, вводится с латеральной стороны непосредственно под каудальный край надколенника. В качестве альтернативы возможно введение иглы с медиальной стороны, также под каудальный край надколенника.

Макроскопические характеристики позволяют во многих случаях различать выпоты невоспалительные, воспалительные и инфекционные. Кроме того, возможно наличие крови в суставной жидкости. Вид выпота позволяет предположить определенное заболевание. Так называемые невоспалительные выпоты на самом деле соответствуют патологическим процессам, характеризующимся слабовыраженным или умеренным воспалением, например остеоартрозу.

Лабораторные исследования внутрисуставной жидкости включают подсчет клеток и оценку их качественного состава, микробиологическое исследование (при подозрении на инфекционный процесс), а также микроскопическое исследование нативного препарата на предмет выявления различных клеток и кристаллов. Тем не менее выбор определенного исследования зависит от предполагаемого диагноза.

Референтные показатели (нормальные) синовиальной жидкости

Исследование синовиальной жидкости играет важную роль в выяснении характера процесса в поражённом суставе.

Показания к пункции суставов: моноартрит неясной этиологии, неприятные ощущения в поражённом суставе (при установленном диагнозе), необходимость контроля эффективности лечения при инфекционном артрите, для дифференциальной диагностики артрита и артроза, поскольку от этого зависит выбор программы дальнейшего обследования и лечения больного.

Данная процедура проводится для диагностики различных воспалительных заболеваний суставов и дистрофических процессов. Костные и хрящевые образования суставов выстланы синовиальной оболочкой, состоящей из соединительной ткани. Клетки этой оболочки продуцируют и выделяют в полость сустава жидкость – синовиальную, которой присущи такие функции, как метаболическая, локомоторная, трофическая и барьерная, играющие важную роль в реализации функций сустава. Она отражает процессы, происходящие в хрящевой ткани и синовиальной оболочке, быстро реагирует при наличии воспаления в суставе. Синовиальная жидкость является важным компонентом сустава и, в значительной степени, определяет его морфофункциональное состояние.

В норме синовиальной жидкости в суставе умеренное количество, однако при некоторых заболеваниях суставов образуется суставной выпот, который и подвергается исследованию. Синовиальную жидкость получают при пункции сустава, чаще всего крупных суставов (коленных, локтевых). Главным условием выполнения пункции сустава является его стерильность.

Стандартная диагностика синовиальной жидкости включает в себя макроскопический анализ (объем, цвет, вязкость, мутность, муциновый сгусток), подсчет количества клеток, микроскопию нативного препарата, цитологическое исследование окрашенного препарата.

В норме отмечается соломенно-желтый (светло-желтый) цвет жидкости, при этом окраска может оставаться желтой при артритах, анкилозирующем спондилоартрите. При воспалении цвет синовиальной жидкости меняется в зависимости от характера изменений в синовиальной оболочке. Стоит отметить, что при ревматоидном и псориатическом артритах окраска колеблется от желтого до зеленого цветов. При бактериальных или травматических повреждениях окраска синовиальной жидкости может иметь цвет «мясных помоев».

В здоровом суставе синовиальная жидкость является прозрачной. При ревматоидном, псориатическом или септических артритах происходит её помутнение.

Вязкость может значительно колебаться в зависимости от рН, концентрации солей, наличия раннее вводимых в сустав препаратов, а также степени полимеризации гиалуроновой кислоты. Высокий уровень вязкости отмечается при травматических изменениях и системной красной волчанке, а снижение данного показателя чаще отмечается при ревматизме, синдроме Рейтера, ревматоидном, подагрическом и псориатическом артритах, артрозах, анкилозирующем спондилоартрите.

Важная особенность синовиальной жидкости - способность к образованию муцинового сгустка после смешивания с уксусной кислотой, при этом рыхлый сгусток чаще определяется при воспалении в суставе.

В то же время ведущим в определении патологии сустава является микроскопическое исследование синовиальной жидкости.

Важное диагностическое значение имеет подсчет числа клеток в препарате (в норме до 200 клеток/мкл). Увеличение количества клеток (цитоз) позволяет дифференцировать воспалительные и дистрофические заболевания и оценивать динамику воспалительного процесса. Выраженный цитоз (30.000-50.000) характерен для острого периода воспаления при любых артритах, умеренный цитоз (до 20-30.000) отмечен при псевдоподагре, синдроме Рейтера, псориатическом артрите. Незначительный цитоз характерен преимущественно для микрокристаллических артритов. Цитоз более 50.000 в большинстве случаев указывает на наличие бактериального артрита.

В синовиальной жидкости может быть идентифицировано большое количество разнообразных кристаллов. Однако диагностическую ценность представляют только два типа из них. Кристаллы урата натрия являются признаком подагры, а кристаллы дигидропирофосфата кальция обнаруживаются при псевдоподагре. Эти кристаллы могут быть выявлены при поляризационной микроскопии.

В норме в синовиальной жидкости обнаруживаются и клетки тканевого происхождения (синовиоциты, гистиоциты), а также элементы крови. Это преимущественно лимфоциты, реже - нейтрофилы и моноциты. При воспалении в синовиальной жидкости могут встречаться особые формы нейтрофилов - рагоциты. Их клетки имеют "ячеистый" вид за счет включения иммунных комплексов в цитоплазму. Это наиболее характерный признаки при ревматоидном артрите. При некоторых состояниях (аллергические синовиты, туберкулезный процесс, артриты на фоне новообразований) в синовиальной жидкости преобладают мононуклеары.

Содержание белка в синовиальной жидкости заметно меньше нежели в крови и составляет (10-20г/л). При остеоартрозе и посттравматических артритах значимого повышения протеина не обнаруживается. При воспалительных артропатиях уровень белка в синовиальной жидкости повышается более 20 г/л. Вместе с этим можно отметить повышение уровня лактатдегидрогиназы, острофазовых показателей при воспалительных заболеваниях суставов (чаще С-реактивного белка).

Менее чувствительным маркеров воспаления в суставе является снижение уровня глюкозы, при этом значимое снижение чаще всего отмечается при бактериальных артритах.

При микроскопическом исследовании мазка можно выявить гонококки, хламидии, а также грам-положительные кокки. Также при микроскопии можно выявить наличие грибкового процесса. Иногда приходиться прибегать к посеву синовиальной жидкости на патогенную микрофлору для уточнения характера инфекционного процесса и определения чувствительности к антибиотикам.

Исследование синовиальной жидкости остается одним из самых важных диагностических методов при воспалительных заболеваниях суставов. Однако интерпретация данных этого метода должна осуществляться врачом-ревматологом с учетом данных анамнеза, осмотра, а также инструментальных и лабораторных
методов исследования.

Проведение пункции воспаленных суставов и последующее исследование синовиальной жидкости должно проводиться только после консультации ревматолога, которую можно пройти в нашей больнице.

Анализ синовиальной жидкости — лабораторное исследование скопившегося в полости сустава выпота. Процедура взятия суставной жидкости для анализа называется .

Сустав построен из двух (и более) костей покрытых в месте соприкосновения хрящом. Снаружи окутан прочной и герметичной синовиальной сумкой, усиленной связками и сухожилиями. Изнутри синовиальную сумку выстилают клетки, вырабатывающие синовиальную жидкость. Синовиальная жидкость заполняет все полости и щели в суставе.

Благодаря суставам тело может двигаться как единое целое, а суставная жидкость придает движениям плавность.

Анализ суставной/синовиальной жидкости т ак же важен в диагностике заболеваний суставов, как и общий анализ мочи для выявления почечной патологии или общий анализ крови в диагностике малокровия.

Синовиальная жидкость — это

Синовиальная или суставная жидкость или синовий — это вязкая неньютоновская жидкость, находится в полости всех суставов. По консистенции похожа на яичный белок (откуда и получила свое латинское название), а по химическому составу аналогична плазме .

Суставная жидкость в 20 раз гуще крови!

Состав

• фибробласты в синовиальной оболочке вырабатывают гиалуроновую кислоту , (общее количество 3-4 мг/л)
• любрицин (протеогликан 4) — смазывает и облегчает скольжение суставных поверхностей
• интерстициальная жидкость — профильтрованная плазма крови
• ферменты — протеиназы и коллагеназы
• белки — часть поступает из крови, часть синтезируется непосредственно синовиальной оболочкой
• , и прочие компоненты
• клетки — минимальное количество и , единичные для удаления микробов и стареющих клеток синовиальной оболочки в процессе износа сустава

Функции

Суставная жидкость — это плавающая смазка между хрящами в суставе. Становится плотнее при активном движении и жиже в состоянии покоя. Амортизирует и снижает силу удара при беге и прыжках. Поставляет питательные вещества хрящу и удаляет продукты обмена.

Быстро реагирует на все изменения в суставе, выполняя роль индикатора патологического процесса.

Показания

Лабораторное исследование суставной жидкости необходимо для диагностики заболеваний суставов неясного происхождения, особенно для дифференциальной диагностики септического и подагрического артритов, острого моноартрита.

Симптомы-показания к пункции сустава и анализу синовиальной жидкости:

• выпот в суставе
• острая или хроническая хромота
• рука или нога не выполняют функцию опоры из-за боли в суставе
• сочетание с повышением температуры тела, деформацией сустава, его покраснением и отеком
• значительная

Артроцентез

Артроцентез или пункция сустава — это процедура удаления жидкости из полости сустава для последующего лабораторного анализа или же с целью лечения — уменьшения напряжения и боли, введения лекарственных препаратов.

Артроцентез при артрографии — в сустав вводят контрастное вещество и делают серию рентген-снимков. Один из вариантов диагностического применения артроцентеза. Вытеснена более информативными КТ и МРТ.

Артроцентез практически не имеет противопоказаний. Относительное препятствие к пункции — инфекция кожных покровов в месте будущей пункции, продолжающеея кровотечение в сустав, общее тяжелое состояние. Н аиболее часто пунктируют коленный сустав, затем по мере снижения — плечевой, локтевой, лучезапястный, голеностопный, височно-нижнечелюстной.

Специальная подготовка не нужна. Желательно воздержаться от приема пищи за 8-10 часов до процедуры.

Перед пункцией сустава необходимо сообщить врачу о наличии аллергии на любые лекарственные препараты, особенно местные анестетики и йод. При приеме лекарств разжижающих кровь (аспирин, клопидогрель, варфарин) может потребоваться их отмена на несколько дней перед манипуляцией. При необходимости предварительно делают , анализ и .

Выполнение

Кожу в месте будущего прокола дезинфицируют и обезболивают. Врач вводит большую пункционную иглу через кожу и синовиальную оболочку в полость сустава.В стерильный шприц аспирирует суставную жидкость.

Процедура длится несколько минут, после чего на место пункции накладывают давящую повязку.

Шприц с синовиальной жидкостью немедленно отправляют для исследования в лабораторию. Реже — переливают в пробирку с антиагрегантом (гепарином).

Если планируется исследование глюкозы в синовиальной жидкости, то перед артроцентезом берут образец крови, чтоб установить уровень гликемии.

Осложнения

• инфицирование сустава — крайне редко, риск выше при повторных пункциях
• кровотечение в полость сустава
• боль, повреждение хряща или нерва, разрыв связки

Синовиальная жидкость в норме

Синовиальной жидкости в норме очень мало. В коленном суставе от 0,5 до 4 мл, а в плечевом — до 3 мл. Она светло-желтая, прозрачная, вязкая, без примесей.

Что исследуют?

• физические свойства — количество, цвет, прозрачность, вязкость, рН (кислотность)
• химические параметры — глюкоза, мочевая кислота,
• микроскопия окрашенного мазка — общее количество , синовиальной жидкости, атипичные клетки
• микроскопия в поляризационном микроскопе — для выявления кристаллов
• микроскопия мазка по Грамму и бакпосев на питательные среды — для идентификации возбудителя и определения его чувствительности к антибиотикам

Образование муцинового сгустка в уксусной кислоте не проверяют. Тест малоинформативен.

Дополнительно в суставной жидкости исследуют , комплемент, ферменты, иммуноглобулины, гормоны.

Факторы комплемента повышены при ревматоидном артрите и системной красной волчанке.

Физические свойства

В норме синовиальная жидкость прозрачна , светло-соломенного цвета. При воспалении приобретает различные оттенки мутно-желтого и зеленого. Грязно-белый цвет характерен для кристалл-индуцированной артропатии. Красный, коричневый и оранжевый указывают на кровотечение в сустав различного срока давности, что бывает при нарушении свертываемости крови, травме, новообразованиях, туберкулезном артрите, лечении антикоагулянтами.

Чем активнее воспаление в суставе, тем меньше прозрачность.

Для определения вязкости в каплю синовиальной жидкости погружают и вынимают иглу. В норме длинна образовавшегося усика-ниточки больше 5 см. При воспалении — меньше 5 см.

Вязкость остается в пределах нормы при травматическом артрите, системной красной волчанке, остеоартрозе и пигментном виллонодулярном синовиите. Снижается при острой ревматической лихорадке, ревматоидном артрите, подагре, пиогенном и туберкулезном артритах.

Рисовые тельца — это разрушенная суставная оболочка, покрытая сгустками фибрина, бывает при ревматоидном артрите.

Синовиальная жидкость сворачивается при наличии в ней , попавшего при пункции или предыдущей травме. Сгустки мешают подсчету клеток, поэтому суставную жидкость переливают в пробирку с гепарином.

рН (кислотность) снижается при воспалении.

Химический анализ

В здоровой синовиальной жидкости нет белков с высокой молекулярной массой (фибриноген, альфа- и бета-2-макроглобулины), а общее количество белка равно 10-30 г/л (или треть от уровня в крови).

Причины повышения белка: болезнь Бехтерева, артриты, артропатия при болезни Крона и язвенном колите, подагра, псориатический артрит, синдром Рейтера.

Оценить уровень глюкозы в синовии можно только при наличии данных о ее концентрации в крови. По этой причине артроцентез проводят натще, предварительно взяв образец крови.

В норме синовиальная жидкость содержит на 0,5 ммоль/л меньше глюкозы, чем в крови. Инфекционные заболевания суставов снижают глюкозу на 1,1-5,5 ммоль/л по сравнению с кровью.

Уровень мочевой кислоты в синовиальной жидкости 356-475 мкмоль/л, повышается при подагре.

Молочную кислоту (лактат) исследуют редко, в норме до 2,7 ммоль/л, а при септическом артрите — повышается до 55,5 ммоль/л.

Лактатдегидрогераза (ЛДГ ) повышена при ревматоидном артрите, инфекционном артрите, подагре.

Микроскопия

При просмотре мазкапод микроскопом считают количество и вид клеток и кристаллов в суставной жидкости.

Наличие кристаллов в суставной жидкости проверяют в поляризационном микроскопе. В норме их нет.

Виды кристаллов в синовиальной жидкости при заболеваниях

• урат натрия — подагра
• пирофосфат кальция — псевдоподагра
• кортикостероиды — после инъекций стероидов в полость сустава
• холестерол — остеоартроз и ревматоидный артрит
• гидроксиапатит — кальцифицирующий периартрит, остеоартроз, воспалительный артрит

Микробиологическое исследование

Бакпосев синовиальной жидкости проводят непосредственно после взятия материала.

Расшифровка результата

Результаты исследования синовиальной жидкости сгруппированы следующим образом:

• нормальная — все показатели соответствуют норме
• воспалительная
• не воспалительная
• септическая
• геморрагическая

Невоспалительная синовиальная жидкость

• остеоартроз и дегенеративные заболевания суставов
• травматический артрит
• хроническая подагра или псевдоподагра
• склеродермия
• полимиозит
• системная красная волчанка
• узловая эритема
• нейропатическая артропатия (сустав Шарко), например, при сахарном диабете
• серповидно-клеточная анемия
• гемохроматоз
• акромегалия
• амилоидоз

Воспалительная суставная жидкость

• ревматоидный артрит
• реактивный артрит
• псориатический артрит
• острая ревматическая лихорадка
• острая подагра или псевдоподагра
• склеродермия
• полимиозит
• системная красная волчанки
• болезнь Бехтерева
• воспалительные заболевания кишечника
• вирусная, грибковая, бактериальная инфекция в суставе, болезнь Лайма
• острый приступ подагры

Септические изменения

• гнойная бактериальная инфекция
• септический артрит

Геморрагическая суставная жидкость

• травма
• опухоли
• гемофилия и другие коагулопатии — повышенная кровоточивость при дефиците одного из факторов свертывания
• тяжелый дефицит витамина С (цинга)
• синдром Элерса-Данлоса
• нейропатическая артропатия

Пункция сустава и анализ синовиальной жидкости was last modified: Декабрь 1st, 2017 by Мария Бодян

Цитологическое исследование синовиальной жидкости (СЖ) является простым анализом, который позволяет при любом заболевании суставов с выпотом узнать о воспалительном или невоспалительном характере патологии. В случае воспаления анализ позволяет диагностировать группу метаболической артропатии, представленную в основном подагрой и хондрокальцинозом, когда внутрисуставные микрокристаллы (МК) вызывают воспаление. При этих недугах тестирование СЖ дает возможность осуществить быструю диагностику, точную и надежную.

Цитологические исследования синовиальной жидкости не дорогостоящие, минимально инвазивные, быстрые, технически доступные. При этом, особый интерес представляют два диагностических признака:

• Наличие большого количества клеток является истинным отражением воспалительного заболевания суставов;
• Наличие или отсутствие МК позволяет подтвердить или исключить в течение нескольких минут микрокристаллическую артропатию и определить её характер. Синовиальная жидкость обычно присутствует в очень малых количествах в каждой полости сустава. Ее роль двояка: она действует как смазка, уменьшая трение между суставными поверхностями во время движения, и обеспечивает питание хрящевой ткани, которая не имеет кровоснабжения.

Цитологическое исследование синовиальной жидкости дает полезные сведения о патологии, ответственной за выпот в сустав.

• Особенности микрокристаллов в СЖ - ценная информация при метаболической артропатии
• 500, но <1500, то считают процентное содержание отдельных типов лейкоцитов, обращая особое внимание на их необычные формы.">Клеточность и формула клеточной популяции позволяют выделить пять типов СЖ (Таблица 1). Этот признак имеет только относительное значение, но является ценным для клинициста.

Таблица 1 – Разные типы СЖ по данным цитологии

• Нормальная СЖ прозрачная, бесцветная или желтоватая. Она становится более непрозрачной с увеличением клеточности.
• Вязкость СЖ связана с содержанием гиалуроновой кислоты. Она высокая в нормальной или невоспалительной СЖ. Вязкость легко оценить путем растяжения капли СЖ между двумя пальцами, защищенными перчаткой или напальчниками, и измерения длины нити полученной таким образом. При всех воспалениях вязкость СЖ снижается.
• Образование сгустка характерно для патологической синовиальной жидкости. Действительно, нормальная СЖ свободна от фибриногена и не коагулирует. Тем не менее, любая патологическая СЖ, особенно если это воспалительная, содержит фибрин и образует рыхлый тромб, который сеткой окружает клеточные элементы. Поэтому очень важно, предотвратить свертывание СЖ путем использования антикоагулянтов.

Техника цитологического исследования синовиальной жидкости

1. Взятие СЖ

Для анализа достаточен любой объём, так как тест требует только ничтожно малое количество образца. В свежем состоянии для анализа достаточно капли. СЖ собирают в стерильную пластмассовую пробирку. Для цитологического исследования синовиальной жидкости необходимо применение антикоагулянта. Лучший выбор - гепаринат натрия; оксалат кальция и гепаринат лития должны быть исключены, так как они содержат МК, которые могут быть фагоцитированы полиморфноядерными клетками. По той же причине следует избегать попадания в образец частиц таких как, например, тальк или крахмал с перчаток.

2. Цитологическое исследование свежей синовиальной жидкости

Этот шаг цитологического исследования СЖ следует выполнить как можно скорее после сбора, без задержки каплю (0,05 мл) образца смотреть под покровным стеклом. Центрифугирование не требуется, потому что низко клеточные СЖ редко бывают патологическими. Идентификация МК является трудной задачей и требует поляризационного микроскопа, возможно, с компенсатором и поворотным столом, что позволяет более легко увидеть МК особенно, если их мало. За неимением поляризационного микроскопа анализ может быть осуществлен с сильно закрытой диафрагмой микроскопа, когда выявляются элементы, у которых показатель преломления, отличный от показателя преломления клеточных компонентов. Можно дополнить это исследование определением числа клеток в камере Горяева, что важно для определения природы поражения суставов (табл. 2).

Основные патологические состояния и типы СЖ

Не воспалительные	Воспалительные		Геморрагии
	Ревматоидный полиартрит	Бактериальные инфекции	Травмы-переломы
	Микрокристаллический артрит	Туберкулез	Геморрагический синдром
Остеонекроз	Синдром Рейтера		Гемофилия
Остеохондрит рассекающий	Псориатический ревматизм		Виллезонодулярный синовит
Остеохондроматоз	Ревматизм при воспалительных заболеваниях кишечника		Гемангиома

Если невозможно немедленное цитологическое исследование образца синовиальной жидкости, то его можно отложить до 24 часов, при условии сохранения СЖ при 4 °C или, еще лучше, в морозильнике при - 20 °C. Возможно также приготовить мазок и высушить на воздухе. К могут быть рассмотрены либо прямо, в поляризованном свете, либо после окрашивания по Мей- Грюнвалд -Жиамсу (МГЖ).

3.Окраска по МГЖ

Результаты подсчета количества клеток в свежей СЖ дополняются подсчетом отдельных типов клеток после цитоцентрифугирования, приготовления мазка и окрашивания по МГЖ, что позволяет уточнить природу клеток, присутствующих в СЖ.

Результаты

Цитологическое исследование синовиальной жидкости - тест, полезный для клиницистов, так как позволяет ориентировать обследование на конкретную патологию из многочисленных, которыми может страдать пациент. Для метаболических или микрокристаллических поражений суставов такой анализ является ключевым в обследовании (таблица N 3).

Таблица 3 - Цитологические показатели СЖ при микрокристаллических артритах

Инфекционные артриты

Цитологическое исследование синовиальной жидкости выявляет очень большое количество клеток с преобладанием полинуклеаров, часто видоизмененных . Если инфекция подавлена антибиотиками, то число ПЯЛ менее многочисленное и доказательство инфекции должно основывается на бактериологическом анализе СЖ или на гистологическом исследовании биоптата синовиальной оболочки. Если СЖ богата эозинофилами, необходимо искать микрофиллярии.

Воспалительные ревматические заболевания

Здесь снова клеточность имеет важное значение, а полиморфноядерные лейкоциты (ПЯЛ) самые многочисленные. Эта группа патологии суставов не имеет особого цитологического профиля, отражающего конкретный ревматизм. Но статистически более воспалительными являются СЖ при ревматоидном и реактивном артрите (Фиссингер-Лерой-Рейтера спондилоартрите), чем при СКВ полиартрите, ревматическом пельвиоспондилите или псориатическом артрите.

Метаболические или микрокристаллические артриты

Именно для этой группы заболеваний цитологическое исследование синовиальной жидкости является обоснованным и интересным. Следует отметить, что обнаружение МК не устраняет инфекции, и что бактериологическое обследование остается желательным во всех случаях.

Подагра

Подагра всегда связана с наличием в полости сустава бесчисленного множества МК уратов мононатрия, очень характерной формы и физических характеристик. Это удлиненные МК, игольчатой формы, размером 5-20 микрон в длину, с коническим концом, прокалывающим клеточные мембраны. Жидкость, как правило, очень воспалительная и богата нейтрофилами (рис. 1).

Очень маленькие кристаллы (1-2 мкм) можно увидеть в при бессимптомных выпотах в период между обострениями подагры. Теперь они зачастую внеклеточные. МК натрия урата растворимы в воде, не сохраняются и не выявляются в мазках, окрашенных по МГЖ.

Хондрокальциноз суставов

Эта патология обусловлена наличием в хряще и/или синовиальной оболочке отложений МК дигидрата пирофосфата кальция, вызывающих в острый период симптомы либо псевдоподагры, либо воспалительного ревматоидного или остеоартрита. Ключ к диагностике – выявление характерных МК в СЖ. МК длинной 5-10 мкм, внутри лейкоцитов, в форме прямого или косого параллелепипеда. Их двойное лучепреломление меньше, чем К мочевой кислоты. Эти МК мало растворим в воде и сохраняются после окрашивания по МГЖ. Иногда анализ СЖ в свежем состоянии или после окрашивания МГЖ показывает одновременно МК уратов и пирофосфатов. Эти смешанные поражения суставов не исключительны.

Заболевания суставов и фосфаты кальция

У некоторых пациентов, часто страдающих от кальциноза вращающей манжеты плечевого сустава, может развиться деструктивная артропатия и признаки воспаления СЖ. Симптомы воспаления СЖ связаны с присутствием МК, принадлежащих различным формам фосфата кальция. Наиболее часто – гидроксиапатита, но можно найти и октакальций фосфат и трикальций фосфат. Длина этих кристаллов 0, l - 0,2 µm, они невидны в оптическом микроскопе.

Другие микрокристаллы

При исследовании свежей СЖ иногда выявляются другие разновидности МК, которые включают в себя:

• Оксалат кальция, который можно наблюдать у больных на гемодиализе. Они образуют

МК иногда пирамидальной, иногда неправильной формы или палочки, которые можно принять за пирофосфат кальция;

• МК холестерина - большие, прямоугольные, плоские, часто со скошенным углом. Они наблюдаются при ревматоидном артрите или в возрастном бурсите;
• Производные кортизона, который вводят в сустав с терапевтической целью кристаллизуются там и МК могут сохраняться в течение нескольких недель или месяцев. Они могут вызывать реальный

микрокристаллический артрит. Их форма - переменная величина и они все двулучепреломляющие;

• МК Шарко-Лейдена встречаются редко и могут наблюдаться в жидкости, богатой эозинофилами. Их форма похожа на стрелку компаса, слабо двулучепреломляющие.

Заключение

Цитологическое исследование суставной жидкости - ценный диагностический тест, мало инвазивный, быстрый, доступный, при котором:

Обилие клеток - верное отражение воспалительного характера заболевания суставов,

Наличие или отсутствие МК позволяет подтвердить или исключить, в течение нескольких минут, микрокристаллическую артропатии, и часто определить характер метаболической артропатии.