Helicobacter pylori (Нр), хеликобактерии желудка - это спиралевидные грамотрицательные бактерии, в длину 3 мкм, диаметром около 0,5 мкм. Бактерия имеет 4-6 жгутиков и способна быстро передвигаться по слизистой оболочке желудка. Кокковые формы бактерий обнаруживали в водоемах различных стран. Заражение происходит от человека к человеку.

Инфекция Н.pylori (Нр) желудка является причиной 100% случаев хронического антрального гастрита, 95% случаев дуоденальной язвы, 80-90% случаев доброкачественных немедикаментозных язв желудка, МАLТ- лимфом желудка, 70-80% случаев некардиального рака желудка. Хеликобактериоз желудка - наличие инфекции Н.pylori (Нр) в желудке.

Наличие инфекции Нр в желудке способствует прогрессированию хронического гастрита, в том числе бессимптомно протекающего, с развитием в динамике атрофии слизистой оболочки желудка (предраковое состояние) и в последующем - кишечной метаплазии и дисплазии (предраковые изменения) в слизистой оболочке желудка, а затем - рака желудка.

В связи с вышеизложенным, диагностике Н.pylori (Нр) желудка придается в гастроэнтерологической практике большое значение, как и эрадикации Нр (уничтожение и выведение Нр из желудка).

Хеликобактерии (микроорганизмы) попадают с инфицированными продуктами, водой в желудок и сохраняются на слизистой оболочке желудка. На период нахождения хеликобактерии в желудке сохраняется воспаление слизистой оболочки с вероятным развитием эрозивно-язвенных поражений слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки. При этом хеликобактерии (хеликобактеры, пилорические хеликобактерии) могут являться пусковым фактором в развитии предрака (атрофический гастрит с метаплазией, дисплазией) желудка. При попадании хеликобактерии (Нр) в желудок она адаптируется к жизни на слизистой оболочке желудка. Helicobacter pylori (Нр) является фактором риска для развития язвы желудка и двенадцатиперстной кишки, предраковой патологии желудка (атрофический гастрит, метаплазия, дисплазия) с исходом в рак желудка (многолетний процесс).

Таким образом, длительное нахождение пилорических хеликобактерий в желудке (над слизистой оболочкой) последовательно запускает процессы: хроническое воспаление, гастрит, атрофический гастрит, рак желудка или процессы: хроническое воспаление, гастрит (гастродуоденит), язва желудка (язва двенадцатиперстной кишки).

Еще более поражающим действием на слизистую оболочку желудка (развитие эрозий, язвы, кровотечения) пилорические хеликобактерии оказывают при употреблении пациентом нестероидных противовоспалительных препаратов (диклофенак и др.), аспирина, гормонов и других лекарств.

Диагностика хеликобактерной инфекции обычно производится путём опроса больного на наличие диспептических жалоб и симптомов и затем выполнения тестов, подтверждающих или опровергающих наличие инфекции:

1.Бактериологический метод. С поверхности желудка или кишечника берется мазок-отпечаток и исследуется под микроскопом. Метод имеет большой размах по чувствительности в хеликобактеру, потому что в случае небольшой концентрации на мазок может и не попасть ни одна колония.

2.Серологический метод. В данном случае применяется иммуно-ферментный анализ. Исследуются антитела к хеликобактеру, которые вырабатываются в крови.

3.Морфологический метод. Заключается в исследовании участка биоптата, который окрашивается специальными красителями.

4.Исследование кала. В испраженниях методом иммуно-ферментного анализа ведутся поиски хеликобактера.

5.Полимеразная цепная реакция.

6.Биохимические методы. Они являются экспресс-методами и в настоящее время самыми популярными. Достаточно высокая чувствительность при определении микроба. Первый из них - уреазный тест исследования биоптата. Это выпускаемый в промышленности специальный тест, в который помещается участок желудка и автоматически производится реакция. Второй тест - дыхательный. Основывается на выдыхании воздуха в специальный пакет после приема мочевины. Чувствительность этого метода одна из самых высоких.

Подготовка пациента к проведению уреазного дыхательного теста.

С целью правильного выполнения уреазного дыхательного теста и получения достоверного результата необходимо соблюдать несколько простых правил:

1. Исследование выполняется строго натощак и утром. Накануне возможен легкий ужин, не позднее 22-00. Возможно употребление воды, не позже чем за 1 час до исследования и не более 100 мл.

2. Тест не проводится, если пациент принимает антибиотики, антисекреторные, противовоспалительные препараты, антациды и анальгетики. Выполнить исследование можно по прошествии 2-х недель после завершения приема антисекреторных препаратов и антибиотиков. После приема остальных указанных препаратов перерыв должен быть не менее 5 дней.

В настоящее время Нp-инфекция является одной из наиболее широко распространенных на земном шаре инфекций. Согласно некоторым оценкам, до 50% населения во всем мире инфицированы этим микроорганизмом. У большинства людей заражение происходит в молодом возрасте (до 20 лет), в то время как частота инфицирования взрослого населения составляет около 0,5% в год. Наблюдается обратная зависимость между социально-экономическим положением человека и распространенностью инфекции, вызванной Hp. В США, странах Европы и Океании инфицировано около 1/3 населения, большую часть которой составляют лица старшей возрастной группы. В России процент инфицированных - 85%, В Америке среди белого населения - 50% и среди черного - 70%, в Индии - 100%. Несколько крупных эпидемиологических исследований указывают на более высокую распространенность инфекции у мужчин, чем у женщин (в среднем на 5-20%) . В некоторых развивающихся странах большинство детей инфицируется H.pylori уже к 10-летнему возрасту, а к середине жизни возбудитель обнаруживается практически у каждого человека.

Helicobacter pylori - грамотрицательная микроаэрофильная бактерия, имеющая изогнутую S-образную или слегка спиралевидную форму с 4-6 жгутиками, обуславливающими способность чрезвычайно быстро двигаться даже в густой слизи или агаре. При культивировании на искусственных питательных средах принимает форму палочки, а при длительной культивации - коккоидную форму. Длина бактерии составляет 2,5-3,5 мкм, ширина - 0,5-1,0 мкм. Наиболее благоприятными условиями существования Нр являются температура 37-42oС и рН среды 6-8. При более низких значениях рН (4-6) бактерии сохраняют свою жизнеспособность, но прекращают рост и размножение.

Бактерия Нр открыта в 1979 году австралийским патологом Робином Уорреном и Барри Маршаллом. Им удалось выделить и изолировать этот микроорганизм из проб слизистой оболочки желудка человека, а также они были первыми, кому удалось культивировать этот микроорганизм на искусственных питательных средах. В оригинальной публикации Уоррен и Маршалл высказали предположение, что большинство язв желудка и гастритов у человека вызываются инфицированием микроорганизмом Helicobacter pylori, а не стрессом или острой пищей, как предполагалось ранее. В 2005 году Робин Уоррен и Барри Маршалл были удостоены Нобелевской премии по медицине.

Источником инфекции, вызванной H.pylori, является человек - больной или бактерионоситель. Нр могут обнаруживаться в слюне, испражнениях, зубном налете. Возбудитель передается орально-оральным, фекально-оральным, контактно-бытовым путем. Орально-оральный путь передачи инфекции реализуется при зондировании желудка и фиброгастроскопии в том случае, если для стерилизации эндоскопов и зондов применяются несовершенные методы дезинфекции. Не исключается попадание H.pylori в организм с микроаэрозолем, который образуется при разговоре или кашле. Как правило, все члены семьи бывают инфицированы одним штаммом Hp, что доказывает контактно-бытовой путь передачи.

Несмотря на высокий процент инфицирования населения Hp подавляющее большинство инфицированных лиц не имеют клинических проявлений на момент диагностики, но они представляют собой группу риска, в которой с течением времени развивается ряд заболеваний. У большинства инфицированных лиц клинические проявления болезни не развиваются в течение всей жизни.

*Инфицирование H.pylori является причиной как минимум 327 тыс. новых случаев рака желудка в год.

Инфицирование H.pylori обычно происходит в молодом возрасте, однако то или иное заболевание обычно развивается только спустя несколько десятков лет. В течение этого длительного периода инкубации в организме хозяина развивается иммунный ответ на проникновение возбудителя. Иммунные реакции не в состоянии ликвидировать инфекцию, однако могут иметь важное значение в развитии болезни. В процессе жизнедеятельности микроба в желудке образуется аммиак защищающий его от переваривания желудочным соком, аммиак попадая в кровь разносится по всему организму, повреждая практически все внутренние органы и вызывая нарушения в работе сердечно - сосудистой системы, центральной нервной системы, мочеполовой и эндокринной систем. Во многих случаях инфекция может протекать бессимптомно. Клиническая картина соответствует развившемуся заболеванию.

Показаниями к назначению анализа для выявления НР являются: язвенная болезнь желудка и/или 12-перстной кишки; неязвенная диспепсия; гастро-эзофагеальная рефлюксная болезнь; атрофический гастрит; рак желудка у ближайших родственников; впервые выявленная хеликобактер-инфекция у совместно проживающих лиц или родственников; профилактические обследования, для выявления людей с риском развития язвы или рака желудка; оценка эффективности эрадикационной терапии; невозможность проведения инвазивных методов диагностики (эндоскопия).
Диагностика инфекции Нelicobacter pylori возможна при использовании целого ряда методов, которые позволяют выявить сам микроорганизм, признаки его жизнедеятельности или иммунологический ответ организма на инфекцию (антитела в сыворотке крови). Как правило, пациента направляют на исследование при обнаружении активного воспалительного процесса в желудке или двенадцатперстной кишке.
1) Обнаружение специфических антихеликобактерных антител классов в крови больного.
2) Дыхательные тесты с регистрацией продуктов жизнедеятельности (углекислый газ, аммиак)
3) Обнаружение ДНК бактерии методом ПЦР в анализах кала, слюны, зубном налете.
4) Обнаружение микроорганизмов при микроскопическом исследовании биоптата слизистой оболочки, взятого при ФЭГДС.

Диагностикой и лечением этой инфекции занимается врач-гастроэнтеролог.

Выявление инфекции Helicobacter pylori в отсутствие воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта не является показанием к терапии. Для лечения хеликобактерной инфекции разработано несколько терапевтических схем, включающих один, два или три антибактериальных препарата (амоксициллин, кларитромицин, фуразолидон и др.), антисекреторные средства (омепразол, ранитидин) и препараты висмута.
Контроль за эрадикацией (уничтожением) Helicobacter pylori осуществляют через 2-6 недель после проведенного лечения как минимум двумя методами диагностики из приведенных выше.

Благодаря эндоскопическим методам исследований лечение патологий органов пищеварительной системы становится более результативным. Для изучения патологических изменений слизистых оболочек желудка, а также двенадцатиперстной кишки используют отдельные виды гастроскопии, необходимой не только для выбора правильной схемы лечения, но и для забора материала на проведение биопсии. Процедуру осуществляют специальным прибором, называемым гастроскопом.

Разновидности исследования

Все виды гастроскопии основаны на специальном оптическом эффекте, реализующем передачу изображения с удаленно расположенного устройства, позволяющего врачу осуществить осмотр внутренней поверхности органов. Благодаря такой конструкции гастроскопа с оптико-волоконной системой и способности к преломлению луча света достигается эффект полного отражения. Это позволяет получить неискаженное изображение внутренней части обследуемого органа.

Диагностическая гастроскопия	Лечебная гастроскопия
Метод используют для оценки вида и рельефа слизистой оболочки. При эзофагогастродуоденоскопии (ЭФГДС) появляется возможность, захвата участка слизистой для биопсии. При подозрении на бактериальный гастрит выполняется НР-тестирование на присутствие Helicobacter pylori, основной причины хронического гастрита и пептической язвы	Во время процедуры проводят плановое удаление полипов и доброкачественных образований, перевязывание расширенных вен пищевода, а также устранение долго незаживающих язв на слизистом слое. В экстренных случаях лечебный тест используют для блокирования язвенных кровотечений, удаления полипов, введения лекарственных препаратов, а также инъекций

Совет: поскольку для тестирования шланг гастроскопа попадает в желудок через рот, процедуру сопровождает определенный дискомфорт. Не стоит бояться осмотра, трубка прибора тонкая и не мешает дыханию. Главное условие – выполнять процедуру натощак, а также расслабиться при спокойном темпе дыхания.

Особенности методики

Термином ФГДС называют фиброгастродуоденоскопию. Процедура является эффективным методом обследования, позволяющим диагностировать многие другие виды заболеваний желудочно-кишечного тракта, в том числе онкологию. Часто фиброгастродуоденоскопию называют фиброгастроскопией, однако методы не совсем идентичны.

• Для проведения ФГДС кабинет врача оборудован специальным комплексом с монитором и фиброскопом, позволяющим исследовать поверхность и состояние оболочки желудка. Наличие подвижной камеры открывает возможность для обследования двенадцатиперстной кишки.
• В процессе фиброгастроскопии врач имеет возможность осмотреть только внутренность пищевода, поверхность желудка, его стенки, эпителиальный слой. Исследование назначают при необходимости получения соскоба клеток со стенок желудка, это тест присутствие бактерии хеликобактер.

Важно: как любая врачебная манипуляция, гастроскопия имеет ряд противопоказаний, которые врач учитывает при назначении процедуры. Особых последствий манипуляция не вызывает, кроме неприятных ощущений в горле.

Методы комбинированной диагностики

Проверка на Helicobacter pylori

Инфицирование этим микробом часто называют причиной появления язвенной болезни. Присутствие хеликобактер пилори также становится причиной гастрита и рака желудка. Местом размножения бактерии является кислая среда желудка. Благодаря методике гастроскопии появилась возможность НР-тестирования с обозрением желудочно-кишечного тракта для выбора подходящего участка для биопсии.

Уникальный метод позволяет обнаружить факт уреазной активности микроба, выделяющего углекислый газ при расщеплении мочевины. Забор биоптата выполняется во время гастроскопии. По окраске отобранного материала, размещенного в специальной среде, судят о количестве бактерий, его заселяющих. Экспресс-тест может дать следующие результаты:

• три плюса (первый час исследования) – признаки значительного инфицирования;
• два плюса (через 2-3 часа) – признак умеренного инфицирования;
• один плюс спустя сутки свидетельствует о слабом инфицировании.

Метод гарантирует получение быстрого результата без дополнительных затрат и особой подготовки специалистов. Однако минимальное количество бактерий в биоптате и желудочные кровотечения снижают точность результата.

Гастроскопия с осмотром БДС

Часто ФГС совмещают с осмотром БДС (большой дуоденальный сосочек), место расположения которого – нисходящий участок двенадцатиперстной кишки. Главная задача этой небольшой структуры регулировать ток желчи и панкреатической жидкости, препятствовать попаданию в протоки содержимого кишечника. Использование современных аппаратов гарантирует высокую точность исследования с возможностью обозрения на экране монитора увеличенного изображения. Осмотр БДС увеличивает время гастроскопии на пару минут, манипуляция не болезненная, но весьма неприятная.

Хромоскопия в эндоскопии

Методом пользуются для определения во время ФГДС участков с признаками перерождения эпителиального слоя слизистой, сопровождаемого изъязвлениями и появлением новообразований. Для диагностики слизистую орошают безопасными для человека красителями, которые окрашивают контрастным цветом выбранные участки эпителия. Исследование повышает эффективность диагностики онкозаболеваний органов пищеварения, цветовой тест становится незаменимым дополнением к результатам биопсии и гистологии, но увеличивает продолжительность процедуры.

Совет: если вам назначили фиброгастродуоденоскопию, не стоит пренебрегать советами по подготовке к обследованию. Простые рекомендации врача снизят симптомы дискомфорта неприятной процедуры, а ее результаты не будут вызывать сомнения. Ваша задача – глубоко дышать ртом, не глотать, сохранять позитивное настроение.

Классификация методов выявления инфекции Нelicobacter pylori представлена в таблице.

Инвазивные методы требуют проведения эндоскопического исследования (ФЭГДС) с биопсией и дальнейшим изучением гастробиоптатов. Неинвазивные методы эндоскопического исследования не требуют.

Гистологический метод

Гистологический метод исследования биоптатов СОЖ — микроскопия окрашенных различными способами (гематоксилин-эозином, по Гимзе, толуидиновым синим, по Вартину-Старри) мазков-отпечатков гастробиоптатов. Этот метод позволяет определить выраженность воспаления СОЖ, наличие атрофии, кишечной метаплазии и наличие (степень обсемененности) НР.

Быстрый уреазный тест (Хелпил-тест)

Быстрый уреазный тест (Хелпил-тест) — определение HР по уреазной активности микроорганизма в биоптатах СОЖ. Helicobacter pylori продуцирует уреазу, под влиянием которой происходит гидролиз мочевины с образованием иона аммония. При этом увеличивается рН среды, что можно зафиксировать с помощью изменения цвета индикатора. Гастробиоптаты помещают в раствор, содержащий мочевину и индикатор, изменение цвета которого косвенно свидетельствует о наличии HР.

Молекулярно-генетический метод — ПЦР в биоптате

Молекулярно-генетический метод исследования биоптатов СОЖ с помощью ПЦР позволяет выделять высокопатогенные и низкопатогенные штаммы HР.

Бактериологический метод

Бактериологический метод исследования биоптатов СОЖ: культуральное исследование и определение чувствительности HР к антибиотикам перед терапией первой линии важно проводить в регионах с высокой резистентностью к кларитромицину (более 15-20%), если планируется использовать стандартную трехкомпонентную эрадикационную терапию, одним из компонентов которой является кларитромицин. Бактериологический метод с определением чувствительности к антибиотикам также необходимо применять при неэффективности эрадикационной терапии второй линии.

Исследование кала на наличие антигена HР (ИФА)

ИФА (особенно с применением моноклональных антител) выявления антигена HР в кале является высокочувствительным и специфическим методом как для первичной диагностики инфекции НР, так и для контроля результата лечения.

Серологический метод

Серологический метод (ИФА) — определение антител IgG к HР в сыворотке крови — простой и доступный метод первичного скрининга инфекции. Учитывая, что антитела к HР сохраняются в течение многих месяцев после эрадикации микроорганизма, использование серологического метода не рекомендуется для оценки эффективности проведения эрадикационной терапии.

Уреазный дыхательный тест с 13С-мочевиной

Уреазный дыхательный тест — исследование состава выдыхаемого воздуха после приема раствора мочевины, меченной изотопом углерода (13С). При наличие в желудке обследуемого HР мочевина под действием уреазы, продуцируемой бактерией, подвергается гидролизу до NH4+ и HCO3- с последующим образованием из HCO3- углекислого газа, который, попадая в кровоток, затем выделяется через легкие и может быть определен спектрометром в выдыхаемом воздухе. Этот тест может использоваться как для первичной диагностики HР, так и для оценки эффективности эрадикации.

На фоне инфекции Helicobacter pylori развиваются такие воспалительные заболевания желудочно-кишечного тракта, как язва желудка или двенадцатиперстной кишки, эрозивный гастрит, гастродуоденит.

Catad_tema Функциональные и лабораторные методы диагностики - статьи

Catad_tema Язвенная болезнь - статьи

Показания и методы исследования больных на Helicobacter pylori

ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ П.Я. Григорьев, В.Г. Жуховицкий*, Э.П. Яковенко, Е.В. Таланова
Федеральный Гастроэнтерологический Центр при РКБ №2 МЗ РФ,
* ГКБ им. С.П. Боткина. Москва

В настоящее время доказана роль Helicobacter pylori (Нр) в патогенезе гастрита, дуоденита, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, лимфомы желудка и даже рака желудка.

Диагностика Нр инфекции может осуществляться с помощью методов, непосредственно выявляющих бактерию в биоптате гастродуоденальной слизистой оболочки больного или о присутствии Нр судят по наличию продуктов ее жизнедеятельности. В настоящее время используются следующие тесты: бактериологический, гистологический (или цитологический), уреазный, полимеразная цепная реакция.

Для первичной диагностики чаще используется уреазный и гистологические методы с взятием биоптата через эндоскоп. Диагностические тесты для определения Нр являются особенно полезными для определения адекватности эрадикационной медикаментозной терапии.

INDICATION ТО HP EXAMINATION IN THE PATIENTS AND THE METHODS OF HP EXPOSE

P.la. Grigoryev, V.G. Gzuxovitskyi, E.P. Iakovenko, E.V. Talanova

The HP role in pathogenesis of gastritis, duodenitis, peptic ulcer, gastric limphoma and gastric tumor is proved at the present time. HP infection is revealed with bacteria in gastroduodenal mucosa or with method, which is revealed the products of its vital activity. There are next special methods for HP expose: bacteriological, histological, urease method, polymerasse chain reaction. Urease and histological methods are usually used for primary diagnosis. The methods of HP expose are especially important for HP eradication control.

Прошло 15 лет с тех пор, как была открыта спиралевидной формы бактерия, выделенная из биоптата слизистой оболочки (СО) желудка больного с антральным гастритом (Б. Маршалл, Д. Уоррен, Австралия). Установлено, что этот микроорганизм, получивший название Helicobacter pylori (HP), является грамотрицательной, активно подвижной, оксидазо- и каталазоположительной, микроаэрофильной бактерией, обладающей необычайно высоким уровнем продукции уреазы, играющей заметную роль в метаболизме НР и решающую - при колонизации СО, защищенной от банальной микрофлоры соляной кислотой - одним из наиболее мощных неспецифических факторов естественной резистентности. Многочисленные исследования, проведенные за истекшие годы учеными разных стран, позволили раскрыть патогенез многих гастродуоденальных заболеваний и показать, что уничтожение (эрадикация) возбудителя с помощью медикаментозных комбинаций приводит к исчезновению симптомов заболеваний, ассоциированных с HP. После успешной эрадикационной терапии исчезают не только микроорганизмы, персистирующие в СО желудка и двенадцатиперстной кишки, но и признаки специфического воспаления (инфильтрация полиморфноядерными нейтрофилами, лимфоцитами и плазмоцитами межэпителиальных пространств и собственной пластинки), а в ряде случаев регрессируют метаплазия, дисплазия и даже атрофия. Прогрессирующее течение гастродуоденита с рецидивом язв в желудке или в двенадцатиперстной кишке чаще связано с неэффективностью эрадикационной терапии и реже - с реинфекцией, то есть, с повторным инфицированием СО HP. Доказана роль HP в патогенезе гастрита, дуоденита, язвенной болезни желудка (ЯБЖ), язвенной болезни двенадцатиперстной кишки (ЯБДПК), MALT - лимфомы желудка (мукоза ассоциированная лимфоидная ткань) и даже рака желудка (схема).

Схема
Клинические варианты инфекции HP

Коль скоро HP играет столь заметную роль в патогенезе весьма серьезных заболеваний гастродуоденальной области, микробиологической диагностике хеликобактерных поражений должно быть по праву отведено место в комплексе диагностических мероприятий. Подобного рода диагностика может быть осуществлена с помощью различных методов исследования, позволяющих прямым или косвенным образом верифицировать присутствие HP в СО желудка и (или) двенадцатиперстной кишки. К микробиологическим методам прямого выявления HP относятся микроскопический метод исследования, выполняющийся одномоментно с гистологическим (изредка - с цитологическим), и бактериологический метод исследования - как в классической аранжировке, предусматривающей выделение чистой культуры HP и идентификацию ее, так и в аранжировке, опирающейся на применение полимеразной цепной реакции (ПЦР), позволяющей идентифицировать HP без выделения чистой культуры: по присутствующим в исследуемом материале фрагментам его генома. К микробиологическим методам косвенного выявления HP относятся серологический метод исследования и бактериологический метод исследования в нетрадиционных, весьма неожиданных, на первый взгляд, аранжировках: быстром уреазном и дыхательном тестах. Ни один из перечисленных методов исследования, в какой бы методике он ни выполнялся, не является абсолютно достоверным или, хотя бы, наиболее предпочтительным: выбор метода (-ов) исследования определяется клиническими особенностями диагностического случая, уровнем оснащенности микробиологической лаборатории и медицинского учреждения в целом, стоимостью исследования, согласием пациента на выполнение того или иного теста.

За исключением дыхательного, все перечисленные тесты, в рамках какого бы метода исследования они не выполнялись, являются инвазивными: исследуемым материалом для микроскопического и бактериологического методов исследования служит биоптат СО или иной локализации, получаемый в ходе верхней эзофагогастродуоденоскопии с помощью прицельной биопсии; сыворотка крови служит материалом для серологического исследования; в рамках неинвазивного дыхательного теста исследуется выдыхаемый воздух. Очевидно, отбор образцов СО остается в компетенции врача-эндоскописта, тогда как образцы крови и выдыхаемого воздуха могут быть отобраны усилиями среднего медицинского персонала. Врачом-эндоскопистом же в условиях эндоскопического кабинета осуществляется и постановка быстрого уреазного теста, врачом-гастроэнтерологом может быть осуществлена постановка тестов по ускоренному выявлению антител к HP - весьма распространенной в настоящее время аранжировке серологического метода исследования, не требующей специальной аппаратуры; выполнение всех прочих видов лабораторного исследования может быть в полной мере осуществлено лишь в условиях специализированных лабораторий соответствующего профиля - патоморфологической, бактериологической, изотопной диагностики, - зачастую находящихся за пределами не только медицинского учреждения, но и за пределами городов и стран (!), где это учреждение расположено.

Согласно требованиям Сиднейской классификации гастритов (Sydney, 1990; Houston, 1994), достоверность результатов гистологической и микроскопической диагностики обеспечивается исследованием четырех образцов СО, отобранных строго определенным образом в антральном отделе и теле желудка; выполнение быстрого уреазного теста предусматривает наличие отдельного образца СО; для выполнения бактериологического исследования необходимо наличие двух таких образцов. При гистологической и микроскопической диагностике язвенной болезни вне зависимости от локализации язвы исследуется образцы СО антрального отдела и тела желудка, а также преульцерозной зоны: зоны гастрита или дуоденита, окружающей желудочную или дуоденальную язвы; два отдельных образца подлежат бактериологическому исследованию, один - исследованию с помощью быстрого уреазного теста; отбор материала из кратера язвы может быть расценен как заведомо бесполезный: HP самопроизвольно элиминируется из участков некротизированной СО, лишенных необходимых для его фиксации рецепторов адгезии - атрибута апикальных поверхностей клеток поверхностного эпителия желудка или претерпевших метаплазию желудочного типа клеток эпителия луковицы двенадцатиперстной кишки. Отбор необходимых для серологической диагностики образцов центральной либо периферической крови и получение из них сыворотки производятся обычным образом. Пробы выдыхаемого воздуха, необходимые для выполнения дыхательного теста, отбираются в специальную надежно герметизирующуюся лабораторную посуду.

Образцы СО, подлежащие одномоментному гистологическому и микроскопическому исследованию, помещаются в фиксирующие растворы и транспортируются в лабораторию патоморфологии; образцы СО, подлежащие бактериологическому исследованию, немедленно после отбора помещаются в транспортную среду и транспортируются в бактериологическую лабораторию, причем, в возможно более короткие сроки; в бактериологическую же лабораторию, не позднее двух суток, считая от момента отбора, направляются и образцы крови или ее сыворотки; пробы выдыхаемого воздуха транспортируются в лабораторию изотопной диагностики без каких-либо ограничений по времени.

В ходе микроскопического исследования, выполняющегося, как отмечалось выше, одномоментно с гистологическим, в окрашенных тем или иным способом мазках оцениваются, во-первых, характер воспаления, активность гастрита, наличие и степень выраженности атрофии и (или) интестинальной метаплазии и, во-вторых, наличие HP и степень обсемененности им СО.

Бактериологический метод исследования является важнейшим методом микробиологической диагностики хеликобактериоза, в ходе которого из гомогенизированного образца СО, посеянного на искусственную питательную среду того или иного - причем, весьма сложного - состава и культивированного в микроаэрофильной - обедненной кислородом и обогащенной углекислым газом - атмосфере, выделяется жизнеспособная культура HP, доступная всесторонней оценке: типированию, эпидемиологическому маркированию, оценке чувствительности к антибиотикам, выявлению факторов патогенности, экспериментальному изучению. Выделенные культуры HP подлежат музейному хранению в условиях глубокого замораживания, что позволяет сравнивать между собой культуры, выделенные в разное время от одного и того же пациента, дифференцируя, тем самым, случаи рецидивирования, реинфицирования, суперинфицирования.

ПЦР - технология открыла новые возможности бактериологической диагностики хеликобактериоза: идентификацию HP не только в чистых культурах, но и непосредственно в исследуемом материале, минуя трудоемкую, продолжительную и дорогостоящую процедуру культивирования его на искусственных питательных средах. В обоих случаях идентификация HP основывается на выявлении фрагмента того или иного гена HP, обнаруживающегося комплиментарными его флангам затравками - синтетическими олигонуклеотидами заведомо известного состава (праймерами) - и многократно копирующегося (амплифицирующегося) в присутствии оригинального фермента в строго заданном режиме, поддерживающемся предназначенным для этой цели программируемым аппаратом - термоциклером (амплификатором).

И быстрый уреазный, и дыхательный тесты базируются на принципе выявления уреазной активности в образце СО и в выдыхаемом воздухе соответственно; хотя в обоих случаях, не предусматривающих выделения чистой культуры HP, источник этого вида активности остается принципиально неутонченным, специфичность обоим тестам придает именно высокий уровень продукции уреазы, свойственный HP: прочие уреазопродуценты - Proteus, Staphylococcus, Candida, - зачастую, главным, образом, при анацидном гастрите, присутствующие в желудке, обладают достоверно более низким уровнем продукции уреазы и манифестируют свою уреазную активность в достоверно более поздние, нежели HP, сроки. В рамках быстрого уреазного теста наличие уреазной активности устанавливается по изменению окраски индикатора, реагирующего на защелачивание содержащей мочевину основы, возникающее вследствие гидролиза мочевины до аммиака в присутствии уреазы; очевидно, корректность интерпретации результатов рассматриваемого теста во многом определяется соблюдением требования учета результатов в установленные методическими рекомендациями сроки. Второй продукт гидролиза мочевины в присутствии уреазы - углекислота - может быть обнаружен в газообразной форме в составе выдыхаемого воздуха в рамках дыхательного теста - при условии, что в состав его молекул входит индикаторный изотоп углерода - 13 С или 14 С - изначально в качестве метки включенный в состав молекул мочевины, принимаемой больным внутрь за несколько минут до отбора исследуемой пробы: присутствие индикаторного изотопа регистрируется сцинтиллографически или масс-спектрометрически в достоверно более высоких количествах и в достоверно более ранение сроки в выдыхаемом воздухе пацицентов, СО которых колонизирована HP, нежели свободных от HP лиц.

Серологический метод исследования занимает весьма важное место в микробиологической диагностике хеликобактериоза и важнейшее - в популяционно-эпидемиологических исследованиях: с его помощью оценивается гуморальный иммунный ответ пациента на антигены HP. Наиболее специфичными и чувствительными, а также наиболее трудоемкими и дорогостоящими, являются тесты, основанные на применении иммунного блоттинга: с их помощью могут быть выявлены антитела классов М, G, А к различным антигенам HP, в том числе, к тем его антигенам, антитела к которым не выявляются с помощью иных, более доступных и простых в исполнении, методик.

Наиболее распространенным тестом серологической диагностики хеликобактериоза остается непрямой иммуноферментный анализ (ИФА), позволяющий с достаточно высокой специфичностью и чувствительностью при относительно низких затратах выявлять антитела классов М, G, А ко многим, хотя и не ко всем значимым для диагностики, антигенам HP. Наконец, получившие широкое распространение в последние годы так называемые "экспресс-тесты", основанные на принципе "сухого" хроматографического разделения белков сыворотки крови с последующим связыванием иммуноглобулинов соответствующими им антигенами, иммобилизованными на носителе, остаются незаменимыми при скрининге пациентов, определяющем стратегию и тактику последующего наблюдения: с помощью тестов подобного рода может быть качественно оценен поливалентный гуморальный иммунный ответ на комплекс антигенов HP; относительно низкий уровень специфичности и чувствительности этих тестов требует особой корректности при интерпретации приносимых ими результатов - лишь строгое соблюдение последнего условия дает право на широкое применение таких тестов, привлекательность которых во многом обусловлена низкой их стоимостью и ничтожностью трудовых затрат, необходимых для их выполнения.

Во многих рекомендациях подчеркивается, что из-за высокой стоимости тестов не во всех случаях следует подтверждать результат эрадикационной терапии, но эти исследования являются обязательными при лимфоме желудка, осложненной ЯБЖ и ЯБДПК (язвенное кровотечение и др.), а также после резекции раннего рака желудка. В иных ситуациях эти вопросы решаются индивидуально, однако, результат эрадикационной терапии можно достоверно оценить, если тесты на HP будут проведены не ранее 4-х недель после прекращения всех видов медикаментозного лечения. При желудочных язвах и лимфоме желудка в стадии ремиссии, наступившей вследствие комбинированной медикаментозной терапии, является обязательным проведение контрольной эндоскопии, множественной прицельной биопсии, щеточной цитологии и гистологии биоптатов.

Посевы на HP и определение чувствительности ее к антибактериальным препаратам производятся при отсутствии эффекта эрадикационной терапии после проведения курса комбинированной терапии и рецидивирующем течении заболевания.

Многие тесты, использующиеся для диагностики HP, являются информативными, но их результаты зависят от правильности забора материала для исследования, четкости выполнения методики и ряда других обстоятельств, в связи с чем иногда возникают ложноположительные и ложноотрицательные результаты заключения при исследовании биоптатов.

Диагностические тесты на HP являются особенно полезными для определения адекватности медикаментозной эрадикационной терапии. При выборе метода диагностики HP следует учитывать клинические проявления пилорического хеликобактериоза. В связи с этим становится целесообразным рассмотреть некоторые наиболее типичные клинические ситуации.

1. Больному с диагностированной ЯБДПК, ассоциированной с HP, проведен курс эрадикационной медикаментозной терапии (10 дней) и пролонгированное лечение антисекреторным препаратом в течение 8 недель. Симптомы, которые имелись у больного до начала лечения, купировались на фоне терапии в течение недели. Эзофагогастродуоденоскопия, биопсия, гистология и тесты на HP через 4 недели и более могут не проводиться, но, если больной настаивает, то целесообразно проведение только уреазного дыхательного теста. Некоторые специалисты полагают, что при обнаружении дуоденальной язвы вообще нет необходимости в проведении исследований на Нр, так как у этих больных в 95% случаев выявляется инфицированность гастродуоденальной СО. Однако в этой ситуации не так важен факт наличия инфекции Нр, как ее отсутствие. Отрицательные тесты на Нр побуждают врача к выяснению других причин возникновения дуоденальной язвы (синдром Золлингера-Эллисона, болезнь Крона, прием НПВП).

2. Больные с гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью в связи рецидивирующим рефлюксэзофагитом нередко в течение длительного времени принимают омепразол или аналоги, а между тем известно, что даже при наличии антрального геликобактерного гастрита происходит транслокация Нр из антрума в тело желудка, в связи с этим развивается пангастрит, а в последующем прогрессирует атрофия, предшествующая нередко раку желудка. В этой ситуации оправдано проведение тестов на Нр и эрадикационной терапии, однако в данном случае эрадикационную терапию лучше провести до назначения блокаторов протонной помпы, то есть исследования на Нр почти всегда оправдываются целесообразностью последующего проведения курса эрадикационной терапии.

3. Язвенноподобные диспепсические расстройства, впервые возникшие. Они могут быть проявлением многих заболеваний верхних отделов пищеварительного тракта, но для уточнения заболевания необходимо: эзофагогастродуоденоскопия, прицельная биопсия и проведение быстрого уреазного теста на НР. При обнаружении язвы в желудке обязательно провести щеточную цитологию и гистологическое исследование биоптатов, при выявлении язвы в двенадцатиперстной кишке можно ограничиться щеточной цитологией и быстрым уреазным тестом, при отсутствии изъязвлений в СО необходимо проведение гистологического исследования для определения активности, выраженности и распространенности гастрита, ассоциированного с НР или с другими патологическими факторами. В этой клинической ситуации оправдано проведение уреазного теста, так как при всех перечисленных заболеваниях, ассоциированных с НР, показано проведение комбинированной эрадикационной медикаментозной терапии.

4. Голодные ночные боли в подложечной области вновь возникли у больного, который год тому назад лечился по поводу обострения язвенной болезни с локализацией рецидивирующей язвы в двенадцатиперстной кишке, развившейся на фоне хронического активного гастродуоденита, ассоциированного с НР. Перед тем, как назначить комбинированную медикаментозную терапию с учетом НР, целесообразно провести уреазный дыхательный тест с 13 С или 14 С, или тест с определением антител к НР.

5. На фоне приема ацетилсалициловой кислоты у больного с диспепсическим синдромом была однократная рвота содержимым типа "кофейной гущи" и дважды неоформленный черного цвета стул. Необходима неотложная эзофагогастродуоденоскопия, прицельная биопсия, цитология с окраской препарата по Гимзе и уреазный тест, так как у больных, принимавших НПВС, изъязвления гастродуоденальной СО и кровотечения чаще связаны с наличием хронического активного гастродуоденита, ассоциированного не только с НПВС, но и с НР. Этим больным должна проводиться эрадикационная терапия.